I due moduli del corso saranno portati avanti in maniera integrata come descritto a seguire. Citometria di flusso e microscopia: definizione, cenni storici e applicazioni nella ricerca biologica. Nozioni di base su ciclo cellulare, mitosi e meccanismi di morte come esempi di processi biologici studiati mediante citometria e microscopia. Principi di base della citometria di flusso e della microscopia ottica e conoscenza delle principali strumentazioni in uso. Microscopia a fluorescenza. Sonde, proteine fluorescenti e biosensori, in citometria e microscopia. Immunofluorescenza diretta e indiretta dalla preparazione dei campioni all’analisi: comparazione di applicazioni in citometria e microscopia. Microscopia di video-registrazione “time-lapse”: studio di processi dinamici, analisi a singola cellula vs analisi di popolazione, visualizzazione dell’eterogeneità di risposta cellulare a trattamenti, studio della proliferazione e del ciclo vitale di microrganismi, e dell’interazione dinamica ospite-patogeno. Visualizzare interazioni tra proteine con metodi microscopici (FRET/isPLA/BiFC) Applicazioni della piattaforma citometrica: analisi della vitalità, morte cellulare, formazione di specie reattive dell’ossigeno e della funzionalità mitocondriale; valutazione dell'apoptosi e della necrosi; analisi del contenuto di DNA; analisi del ciclo cellulare con approccio mono- e bi-parametrico; studio di marcatori di superficie. Analisi delle immagini e dei dati citometrici: concetti principali connessi con l’analisi di un file citometrico o un’immagine; criteri per la valutazione della positività; principali tipologie di rappresentazione dei dati citometrici o di microscopia. Applicazioni avanzate della citometria: citometro di massa, cell sorting. Citofluorimetria con imaging applicata alla ricerca microbiologica. La citometria di flusso per la diagnostica di tumori ematopietici. Imaging avanzato: super-resolution microscopy, imaging 3D, imaging intravitale, high-content microscopy.

Macey, Marion G. (Ed.) “Flow Cytometry Principles and Applications”, Springer. Articoli scientifici e materiale didattico elaborato dal docente sulla base di articoli scientifici e testi. Utilizzo della piattaforma E-learning per la pubblicazione del materiale didattico.

I due moduli del corso saranno portati avanti in maniera integrata come descritto a seguire. Citometria di flusso e microscopia: definizione, cenni storici e applicazioni nella ricerca biologica. 2 ore. Principi di base della citometria di flusso e della microscopia ottica e conoscenza delle principali strumentazioni in uso. Microscopia a fluorescenza. Sonde, proteine fluorescenti e biosensori, in citometria e microscopia. Immunofluorescenza diretta e indiretta dalla preparazione dei campioni all’analisi: comparazione di applicazioni in citometria e microscopia. (10 ore) Applicazioni microscopia. Microscopia di video-registrazione “time-lapse”: studio di processi dinamici, analisi a singola cellula vs analisi di popolazione, visualizzazione dell’eterogeneità di risposta cellulare a trattamenti, studio della proliferazione e del ciclo vitale di microrganismi, e dell’interazione dinamica ospite-patogeno. Visualizzare interazioni tra proteine con metodi microscopici (FRET/isPLA/BiFC). 6 ore. Applicazioni della piattaforma citometrica: analisi della vitalità, morte cellulare, formazione di specie reattive dell’ossigeno e della funzionalità mitocondriale; valutazione dell'apoptosi e della necrosi; analisi del contenuto di DNA; analisi del ciclo cellulare con approccio mono- e bi-parametrico; studio di marcatori di superficie. 8 ore. Analisi delle immagini e dei dati citometrici: concetti principali connessi con l’analisi di un file citometrico o un’immagine; criteri per la valutazione della positività; principali tipologie di rappresentazione dei dati citometrici o di microscopia. 6 ore. Applicazioni avanzate della citometria: citometro di massa, cell sorting. Citofluorimetria con imaging applicata alla ricerca microbiologica. La citometria di flusso per la diagnostica di tumori ematopietici. 4 ore. Imaging avanzato: super-resolution microscopy, imaging 3D, imaging intravitale, high-content microscopy. 4 ore.

Guy Cox, “Optical Imaging Techniques in Cell Biology” 2nd Edition, CRC Press Articoli scientifici e materiale didattico elaborato dal docente sulla base di articoli scientifici e testi. La bibliografia di riferimento è presente sulla piattaforma E-learning.